Визуализация мезенхимальных стромальных клеток в двумерных и трехмерных культурах методом сканирующей электронной микроскопии

Визуализация клеток в составе тканеинженерных конструкций остается актуальной методической проблемой в клеточной биологии, поскольку существующие подходы не всегда позволяют выявить особенности взаимодействия клеток и клеточного носителя (скаффолда). В статье представлены результаты применения метода СЭМ с лантаноидным контрастированием для визуализации мезенхимальных стромальных клеток, полученных из пульпы молочного зуба, в двумерных и трехмерных культурах – на культуральном пластике и силикатном стекле, пористом полистирене и экспериментальных полилактогликолидных скаффолдах. Показано, что суправитальное окрашивание клеточных культур препаратом на основе лантаноида (хлорида неодима) позволяет сохранить нормальную морфологию клеток, предоставляя возможность оценить матриксные свойства носителей. Разработанный метод может быть широко востребован при разработке биоматериалов, предназначенных для применения в тканевой инженерии. 

Подробнее о методике контрастирования на сайте https://bioree.ru/.

Культура МСК на пластике, контрастированная лантаноидами. СЭМ.
а — съемка в режиме детекции вторичных электронов. б — съемка в режиме детекции обратно-рассеянных электронов. Видно ядро с яркими ядрышками (красная стрелка), тонкие выросты клеточной мембраны (желтая стрелка). Метод лантаноидного контрастирования позволяет получить данные об ультраструктурной позиции основных клеточных органелл в дополнение к микрорельефу внешней поверхности клеток




Культура МСК на скаффолде “Alvetex”, контрастированная лантаноидами. Съемка в режиме детекции обратно-рассеянных электронов.
а — общий вид, б — увеличенный фрагмент. Видно расположение клеток между балками подложки, клетки “растянуты” над пустотами. При этом можно различить ядро с ядрышками (пунктир и стрелка) и компоненты цитоскелета (короткие стрелки).